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Esball-实验室危险物质及处理方法--EBEBEthidium bromide,溴化乙锭

作者:Esball 时间:2021-11-26(22)次浏览

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溴化乙锭是一种高度矫捷的荧光染色剂,用在观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用规范302nm 紫外光透射仪激起并放射出橙红色旌旗灯号,观察琼脂糖凝胶中DNA最经常使用的法子是利用荧光染料溴化乙锭住手染色,溴化乙锭含有一个可以或许嵌入DNA聚积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的分手的确没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,年夜约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭份子。当染料份子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并颠末范德华力与上下碱基相互感化。这个基团的固定位置和其与碱基的密切接近,招致与DNA分手的染料显现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增添。DNA接收254nm处的紫外辐射并传送给染料,而被分手的染料本身接收302nm和366nm的光辐射。这两种状态下,被接收的能量在可见光谱红橙区的590nm处从头发射出来。因为溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有分手DNA的染料超出跨越20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5ug/ml)时,可以或许检测到少至10ng的NDA条带。溴化乙锭可以或许嵌入碱基份子中,招致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60-70度是蒸发(所以最好不要在胶太热的时分加,或应当加到液体里,0.5ug/ml,染色半小时)(当EB加得过量时,也可以或许在室温用水将已染色的凝胶浸泡20min以下降未分手的EB惹起的布景荧光)。 溴化乙锭溶液的净化措置:因为溴化乙锭具有必然的毒性,尝试终了后,应对含EB的溶液住手净化措置再行弃置,以避免污染情况和风险人体安康。

(1) 关在EB含量年夜在0.5mg/ml的溶液,可以下措置:①将EB溶液用水稀释至浓度低在0.5mg/ml; ②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时; ③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并烧毁。

(2)EB含量小在0.5mg/ml的溶液可以下措置:① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时; ② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后抛弃

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